新年伊始,又到了科研人员树立新目标的时候,回想 2022 年,养了 20 余笼小鼠、不下 100 盘细胞、更是做了成百上千次的核酸提取、qPCR、蛋白纯化、测序......
工作做的是不少,拿到的有效数据却少得可怜,其中有三类实验,最常出现问题,那就是:
分子生物学实验过程多,容易出错,先跟你们说 3 点提升蛋白表达成功率的小技巧吧!
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在开始蛋白表达之前,使用密码子优化算法,计算出合适的编码序列,并为其选择最合适的表达载体,从而能够大大提高蛋白的表达成功率,并且可以节省时间LOL赛事押注、精力和成本。
可以尝试在重组蛋白中适当添加「蛋白质标签」,也就是一些短肽序列,这种方法可以有效提高蛋白的表达效率,然后再利用酶切技术或化学试剂去除标签即可。
如果遇到蛋白表达量低,有可能时因为我们用来溶解蛋白的溶液浓度相对较低,这种时候,我们应当考虑适当提升溶解液的浓度。
通过以上 3 种方法可以在很大程度上提升蛋白表达的效率及成功率。同时,在实验操作的时候,需要多注意一些细节方面的问题,比如 pH 值、温度控制等等,细节决定成败,实验过程中更是要处处小心才行呢!
最近有一种新方法「CFS 无细胞蛋白表达系统」,可表达高至 360 kDa 的蛋白,实验步骤简单,无需密码子优化,不会形成包涵体,无需培养细胞,所需的表达时间也大大缩短至一天内,师妹也可以尝试一下!
RNA 上样量最好为 1 μg,最高不超过 2 μg,超过这个范围,会使反转录产物产生偏好性教程知识,也就是表达丰度高的基因会优先被反转录,而造成定量结果不准确。
cDNA 是长短不一的 DNA 片段,由于反转录后体系中含有 dNTP 等物质LOL赛事押注,使得我们利用分光光度计测量浓度不准确;检测 cDNA 一般可以用内参基因做 PCR 扩增,如果内参有结果,cDNA 质量基本可以保证。
热启动酶原理不同启动时间各不相同,抗体修饰的酶启动时间短,化学修饰的酶启动时间长,热启动时间不正确会导致扩增效率下降,该如何设置预变性时间呢?建议大家仔细阅读试剂盒中的说明书,根据说明书的指示设置预变性时间。
科研之路总是充满坎坷,自己苦思冥想也难寻解决办法LOL赛事押注,想要提高自己的实验技术?知道的实验常见问题怎么解决?
传统蛋白表达步骤繁琐耗时长,对于膜蛋白和毒蛋白效果欠佳,是否有既可以缩短实验时间,蛋白表达效果又非常好的新技术呢?TIANGEN 直播间将带你解锁蛋白表达「新姿势」。
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